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開發機能性發酵大豆粕於肉雞及仔豬飼糧之應用

為了解決重亞硫酸鈉sds的問題，作者蔡佳芬 這樣論述：

大豆粕(Soybean meal, SBM)為提供單胃動物主要之飼糧蛋白質來源。近年來，以固態發酵(Solid-state fermentation)生產之發酵大豆粕(Fermented soybean meal, FSBM)，克服大豆粕抗營養因子(Anti-nutritional factors, ANFs)，接著著重於提升

蟻巢傘菌漆氧化酶基因在嗜甲醇酵母系統中的表達

為了解決重亞硫酸鈉sds的問題，作者林怡萱 這樣論述：

蟻巢傘菌(Termitomyces)，又稱為雞肉絲菇 ，起源於非洲，分布於亞熱帶地區，屬於擔子菌類中的一屬，是一種白蟻共生真菌，可以產生分解木質纖維素(Lignocellulose)之酵素：漆氧化酶(Laccase)，最早被發現於日本漆樹，主要為分解共生白蟻食物中的木質素，為一種含有銅離子的多酚氧化酶(polyphenol oxidase , PPO)，可以氧化多種有機化合物。它存在於真菌、植物，或一些細菌之中，能夠分解木質素。本實驗利用與黑翅土白蟻共生的蟻巢傘菌之子實體，經實驗室前人基因選殖獲得漆氧化酶 cDNA 序列，再依據嗜甲醇酵母密碼子使用偏好，設計重組漆氧化酶，委託生技公司合成基因

，將重組漆氧化酶pCYL1004與pCYL2878轉型至 DH5α，純化質體與限制酶切割後選殖目標基因進入 pPICZαA 載體中，經培養與篩選後，將質體線性化，轉型到嗜甲醇酵母菌株，以甲醇誘導表現，獲得具有功能性的重組漆氧化酶，實驗結果顯示: 在BMMY培養基培養pPICZ-CYL2878(X-33)，使用0.5 %甲醇誘導、添加0.4 mM硫酸銅培養10天，粗萃取液活性為50.05 ~ 51.77 U/L；純化後活性為406.15 U/L，約增加為7.84 ~ 8.1倍，比活性為6.9227 U/mg；Native-PAGE膠圖在受質ABTS下有活性呈色； SDS-PAGE CBR染色與硝

酸銀染色膠圖結果顯示，蛋白質大小約70 kDa；酵素動力學分析以2,2′-Azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) diammonium salt (ABTS) 為受質，使用分光光度計測量反應得到Vmax = 0.0166 mM/min、Km = 0.9250 mM、 kcat = 19.8 sec-1；使用光學溶氧度計測量反應得到Vmax = 0.0015 mM/min、Km = 28.7659 mM、 kcat = 1.7899 sec-1。