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利用轉殖植物生產VVYP活性胜肽及特殊胺基酸組成RMGK之研究
為了解決nippon所藏ptt 的問題,作者林家夙 這樣論述:
本研究利用基因工程技術,以大豆為生物反應器大量表現活性胜肽VVYP及特殊胺基酸RMGK。活性胜肽VVYP (Val-Val-Tyr-Pro)具有降低三酸甘油脂的能力進而抑制脂肪的吸收,能有效抑制血液中三酸甘油脂的含量,減少心血管疾病的發生。在許多的雜食性淡水魚類養殖生產中,飼料配方主要來自大豆的原料已有多年的歷史,利用大豆粉取代較為昂貴的魚粉,可大幅降低魚產品的生產成本。然而與魚粉成份相比較,methionine與lysine是大豆產品中含量較缺乏的胺基酸,因此可利用基因工程在大豆基因組中加入這些胺基酸,並添加glycine及arginine增加魚類對大豆粉的嗜口性及提高魚類對疾病的抵抗性。
已知固殺草 (phosphinothricin, PTT)可抑制植物體行光合及光呼吸作用而導致植物體死亡。因此本研究將選用抗PTT之bar作為篩選基因,建立大豆轉殖phosphinothricin篩選系統,以利大豆轉殖株之篩選,經由統計分析,6 及5 mg/L PTT分別為再生芽體及轉殖株後代最適當之篩選濃度。目前已經藉由農桿菌轉殖獲得135株大豆再生植株,然而以PCR及南方點墨法確認僅有一株再生植株含有轉殖基因Gy5-10RMGK,且其轉殖基因無法順利遺傳到下一代。到目前為止,由於大豆轉殖技術尚無法突破,無法得知含有VVYP及RMGK之構築是否能於植物體正常表現外源性蛋白,因此先將這些構築轉
殖至水稻,進一步分析外源蛋白的表現情形,以確認此策略之可行性。利用持續性表現之35S 啟動子,構築含活性胜肽之Gy5-10VVYP及含特殊胺基酸之Gy1-10RMGK載體,藉由農桿菌進行水稻轉殖,本研究室總共獲得16株35S-Gy5-10VVYP及20株35S-Gy1-10RMGK水稻轉殖株,以PCR及南方點墨法確認這些轉殖水稻皆含轉殖基因,並以西方點墨法分析葉片及種子蛋白,確認這些轉殖水稻皆可表現重組蛋白Gy5-10VVYP或Gy1-10RMGK。
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